Le but de ces TP est de mieux comprendre les interactions cellules-matrice extracellulaire. Pour cela, la fibronectine recombinante est surproduite dans la bactérie E. coli, sous sa forme sauvage ou sous différentes formes mutées, afin d'en obtenir de grandes quantités. Ces différentes protéines sont purifiées, dosées, analysées sur gel SDS-PAGE puis utilisées pour réaliser des tests cellulaires d'adhérence et d'étalement en utilisant des cellules immortalisées en culture.
Puis, afin de caractériser les intégrines impliquées dans l'interaction cellules-fibronectine, un test d'adhérence cellulaire est réalisé en présence d'anticorps anti-intégrines. Enfin, la voie de signalisation déclenchée par les interactions cellules-matrice extracellulaire est étudiée en visualisant la phosphorylation de la protéine FAK, soit par Western-blot, soit par Immunofluorescence en microscopie confocale.
Méthodologies :
Appliquer un protocole de manière rigoureuse, et l'adapter si besoin, durant 2 semaines afin d'étudier un phénomène biologique particulier, l'interaction cellules-matrice. Ce TP se déroule dans le même contexte que dans un laboratoire de recherche. Analyser les résultats et développer un raisonnement scientifique.
Techniques :
Production de protéines recombinantes dans la bactérie E. coli, purification de protéines, dosage de protéines, gels SDS-PAGE, analyse des protéines par Western Blot, culture cellulaire, immunofluorescence, tests d'étalement cellulaire, test d'adhérence cellulaire, microscopie confocale.
