Cette UE de travaux pratiques permettra l’ensemble des étapes permettant de vérifier la monodispersité d’un échantillon de macromolécule biologique et de résoudre sa structure à l’échelle atomique par CryoEM, cristallographie aux rayons X et RMN sur un exemple concret: l’oncoprotéine Tax du rétrovirus humain HTLV-1. L’étude structurale sera particulièrement poussée et détaillée dans le cadre de ce TP.
Techniques mises en oeuvre:
- Biologie structurale et biophysique: Manipulations en pièce humides (DLS, SLS, SAXS, cristallogenèse, préparation de grilles, vitrification), enregistrement des données sur instruments dédiés (diffractomètre rayons X, spectromètre RMN, cryo-microscope) traitement de données sur poste informatique (diffraction X, attribution spectre RMN, classes 2D en cryoEM et interprétation de cartes 3D) .
- Biologie moléculaire : PCR, mutagenèse, clonage
- Biochimie des protéines : western-blot
- Double hybride en système levure
- Microbiologie moléculaire : culture, transformation et conjugaison de bactéries et de levures
